ПОЛУЧЕНИЕ И АНАЛИЗ СТАБИЛЬНО ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ И ТРАНСГЕННЫХ МЫШЕЙ, НЕСУЩИХ РАЗЛИЧНЫЕ МУТАНТНЫЕ ФОРМЫ, ГЕНА ПРЕСЕНИЛИНА 1, АССОЦИИРОВАННОГО С БОЛЕЗНЬЮ АЛЬЦГЕЙМЕРА У ЧЕЛОВЕКА
— А. П. Григоренко1, И. В. Бобрышева, Л. Е. Андреева1, Л. И. Чернявская2, Н. Р. Калъина1, Н. В. Гуляева2, И. А. Гривенников1, С. А. Кирьянов3, Г. И. Коровайцева3, Т. В. Щербатых13, В. 3. Тарантул, Е. И. Рогаев3.
1Институт молекулярной генетики РАН, Москва
2Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН, Москва
3Научный центр психического здоровья РАМН, Москва.
Для изучения функции гена пресенилина 1 человека (hPSl), мутации в котором приводят к развитию ранней семейной формы болезни Альцгеймера, были получены модельные системы: стабильно трансфецированные различными вариантами гена PS1 линии клеток феохромоцитомы крысы PC 12 и трансгенные мыши.
Исходные клетки РС12, 4 поликлональных линии стабильных трансфектантов (контрольным вектором pcDNA3, вектором pcDNA3 со вставкой к ДНК дикого типа hPSl, с мутацией в 12 экзоне и транкированной формы) были проанализированы на наличие вставки кДНК и экспрессию гена методами ПЦР, Нозерн-гибридизации и иммуноблотинга. Для всех вариантов трансфекции были также получены стабильные моноклональные линии, экспрессирующие hPSl. Изучалось влияние мутаций в hPSl на дифференцировку и пролиферацию клеток. Показано достоверное ухудшение динамики роста как дифференцированных, так и недифференцированных клеток с мутантным hPSl в условиях культивирования с низким процентом сыворотки. Также была продемонстрирована более низкая резистентность к депривации по факторам роста и к окислительному стрессу у клеток, трансфецированных мутантным hPSl.
Получена и анализируется трансгенная мышь, экспрессирующая транкированную форму hPSl.